Stimate domnule editor,
S-a susținut recent că metoda lui Ellman nu are suficientă acuratețe pentru măsurarea activităților colinesterazelor (ChEs) (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Această metodă a fost introdusă și descrisă pentru prima dată de Ellman și colegii săi și se bazează pe hidroliza derivaților tiocolinei (acetil- sau butiril) de către ChEs (adevărate sau pseudo) și pe reacția tiocolinei rezultate cu reactivul tiol acid 5,5′-dithiobis-2-nitrobenzoic (DTNB) și formarea anionului acid 5-thio-2-nitrobenzoic (TNB). Măsurarea absorbției ionului TNB la 410 nm pentru pseudo-ChE și la 440 nm pentru acetil-ChE reticulocitară determină indirect activitatea ChE (Ellman și colab., 1961). Unii autori au propus că indoxiacetatul este un substrat mai bun decât acetiltiocolina (ATCH), deoarece nu reacționează cu antidotul oximei și tiolul utilizat pentru metoda lui Ellman (Pohanka et al., 2011). În plus, DTNB, care este instabil, interacționează cu grupările sulfhidrilice libere din probă și poate afecta activitatea colinesterazei (Dingova et al., 2014). Alți cercetători au arătat că oximele reacționează cu ATCH (oximoliză), producând tiocolină și, în consecință, ionul TNB (Sinko et al., 2007). Unii autori au menționat, de asemenea, că atunci când concentrația de DTNB este mult mai mare decât concentrația de ATCH, rata de hidroliză a ATCH este diminuată, ceea ce duce la o activitate ChE măsurată mai mică (Komersová et al., 2007).
Deși problemele menționate mai sus au fost enunțate cu privire la metoda lui Ellman, fiecare dintre ele are propria soluție logică. În primul rând, prin simpla diluare adecvată a probei, compușii care conțin tioli și oxime din probă sunt, de asemenea, diluați și, prin urmare, gradul de reacție a DTNB cu aceste substanțe este redus considerabil (Mohammadi et al., 2017). În al doilea rând, coeficienții molari de atenuare ai indoxiacetatului și TNB sunt de 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) și, respectiv, 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961). Astfel, limita de detecție pentru măsurarea activității ChE prin DTNB este de aproximativ 3,5 ori mai mică decât cea prin indoxiacetat. În al treilea rând, pentru concentrații de DTNB de 0,2-0,598 mM, cel mai bun raport dintre concentrațiile DTNB/ATCH este de 1,25-3,74, ceea ce duce la o rată optimă de hidroliză a ATCH de către ChE (Komersová et al., 2007).
.