Raport de caz
Un bărbat de 63 de ani care prezenta un adenocarcinom pulmonar diagnosticat în iulie 2001 a fost internat la Spitalul Universitar Hôtel Dieu, Paris, Franța. A fost inițiată o a cincea cură de chimioterapie intravenoasă constând în cisplatin (50 mg/m2 de suprafață corporală) și vinorelbină (30 mg/m2) prin intermediul unei camere de cateter, care fusese implantată cu 12 săptămâni înainte. Pacientul primise corticosteroizi timp de 2 luni din cauza durerii toracice datorate compresiei tumorale. În ziua următoare internării (ziua 1), starea sa s-a deteriorat cu febră (39,5°C) și frisoane asociate cu o creștere a numărului de globule albe (15 × 103 celule per μl cu 90% neutrofile), a proteinei C reactive (9,5 mg/dl) și a fibrinogenului (0,51 mg/dl). Astfel, a primit cefotaxime (3 g pe zi) și gentamicină (180 mg pe zi) timp de 2 zile. Analiza urinei a fost normală. Radiografia toracică și ecografia abdominală și cardiacă nu au fost modificate. O tulpină de Acinetobacter sp. a fost izolată din cinci probe de sânge, dintre care două obținute din camera cateterului. Camera cateterului a fost îndepărtată, dar cultura acesteia era sterilă. În ziua 3, terapia antimicrobiană a fost schimbată cu imipenem (2 g pe zi) și amikacină (900 mg pe zi) timp de 2 săptămâni, în funcție de sensibilitatea tulpinii. În ziua 5, s-a adăugat rifampicină (1,2 g pe zi) deoarece pacientul a rămas febril. În ziua 7, pacientul era apihoretic, cu normalizarea numărului de globule albe și a proteinei C reactive.
Eșantioanele de sânge au fost inoculate în fiole de hemocultură aerobă și anaerobă (BACTEC PLUS; BD Diagnostic Systems, Sparks, Md.). Fiolele aerobe au fost pozitive și au fost subcultivate pe agar nutritiv la 37°C. După 24 de ore de incubare, coloniile aveau un diametru cuprins între 1 și 1,5 mm, erau circulare, convexe, netede și ușor opace, cu margini întregi. Colorarea bacteriilor a arătat coccobacili gram-negativi. Creșterea în bulionul de infuzie de creier și inimă (BHI) a fost observată la 37 °C, dar nu și la 41 și 44 °C. Microorganismul (izolatul 954) nu era mobil, era strict aerob și era negativ la oxidază. A crescut pe agar MacConkey (colonii incolore), nu a fost hemolitic pe agar sânge de oaie, nu a oxidat d-glucoza, nu a redus nitrații ș i a fost negativ la urează ș i gelatinază. În încercarea de a identifica acest izolat, s-au folosit benzile API 20 NE și API ID 32 GN (bioMérieux, Marcy l’Etoile, Franța), conform recomandărilor producătorului. Identificările bacteriene repetate obținute cu benzile API 20 NE și API ID 32 GN au fost Acinetobacter junii sau Acinetobacter johnsonii (cod nr. 0000071; procent de identificare = 63,5%; indice de tipicitate = 0,77) și, respectiv, A. johnsonii (cod nr. 00270063062; p = 90,5%; T = 0,87). Aceste rezultate ne-au determinat să determinăm secvența genei 16S ARNr (16S ADN ribosomal ) a izolatului, așa cum a fost descrisă anterior (3, 6). Pe scurt, ADNr 16S a fost amplificat prin PCR cu ajutorul amorselor Ad (5′-AGAGAGTTTGATCTGGCTCAG-3′) și rJ (5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′). S-a determinat un total de 1 484 de nucleotide continue de ADNr 16S. Secvența completă de ADNr 16S a izolatului a fost comparată cu toate secvențele bacteriene disponibile în baza de date GenBank cu ajutorul programului Blast (National Center for Biotechnology Information) și a prezentat o similitudine de 99 % cu cea a tulpinii tip de Acinetobacter ursingii (nr. de acces GenBank AJ275038). Secvențele ADNr 16S de la tulpini înrudite filogenetic au fost obținute din baza de date GenBank. Toate secvențele de ADNr 16S au fost aliniate cu CLUSTAL X, iar un arbore filogenetic a fost construit cu ajutorul DENDROGRAF, un program din pachetul Taxotron (Taxolab Institut Pasteur, Paris, Franța) (Fig. (Fig.1).1). Sensibilitatea antimicrobiană a izolatului a fost determinată prin metoda de difuzie în agar, utilizând testul Epsilometer (testul E; AB BIODISK, Solna, Suedia) pe agar Mueller-Hinton, conform recomandărilor producătorului. Rezultatele CMI au fost următoarele: amoxicilină, 16 μg/ml; piperacilină, 12 μg/ml; cefotaxime, 32 μg/ml; cefepime, 24 μg/ml; ceftazidimă, 128 μg/ml; imipenem, 0.125 μg/ml; gentamicină, 0,25 μg/ml; amikacină, 1 μg/ml; tobramicină, 0,5 μg/ml; rifampicină, 3 μg/ml; ciprofloxacină, 0,19 μg/ml. Un test pentru detectarea beta-lactamazei prin utilizarea unui disc de nitrocefină (BD Cefinase; BD Diagnostic Systems) a fost pozitiv.
Arborele filogenetic al izolatului 954 de A. ursingii și al tulpinilor tip ale speciilor înrudite pe baza analizei comparative a secvențelor genei ARNr 16S. Alinierea secvențelor a fost realizată prin metoda CLUSTAL. Dendrograma a fost generată prin utilizarea algoritmului de alăturare a vecinilor și alegerea Pseudomonas aeruginosa ca outgroup. %Knuc, procentul de substituție nucleotidică.
Membrii genului Acinetobacter aparțin subdiviziunii gamma a clasei Proteobacteria. În 1986, Bouvet și Grimont au descris patru specii noi de Acinetobacter, și anume, Acinetobacter baumannii, Acinetobacter haemolyticus, A. johnsonii și A. junii (2). În plus, acești autori au modificat descrierile altor două specii, Acinetobacter calcoaceticus și Acinetobacter lwoffii. În 1988, a fost descris Acinetobacter radioresistens, provenit din mediul înconjurător (9). Mai recent, au fost delimitate A. ursingii și Acinetobacter schindleri, izolate din specimene clinice umane (7, 8). Astfel, în prezent, genul Acinetobacter este format din cele nouă specii de mai sus. Cu toate acestea, acest lucru rămâne insuficient pentru a denumi toți membrii acestui gen, după cum arată cele 21 de grupuri ADN diferite (genomo-specii) raportate anterior (5). În laboratoarele clinice, identificarea tijelor gram-negative nefermentative se realizează, de obicei, prin utilizarea unor sisteme de identificare, cum ar fi API 20 NE și API ID 32 GN (bioMérieux). A. baumannii, cea mai frecventă specie de Acinetobacter implicată în infecțiile nosocomiale, este ușor de identificat cu aceste sisteme. Cu toate acestea, puterea de discriminare a testelor care utilizează benzile API s-a dovedit a fi insuficientă pentru identificarea precisă a celorlalte specii de Acinetobacter (1). În cazul de față, identificarea preliminară eronată s-a datorat absenței A. ursingii în bazele de date ale benzilor API 20 NE și API ID 32 GN. Teste fenotipice suplimentare, cum ar fi creșterea în bulion BHI la 37 și 41°C și oxidarea glutaratului și a l-aspartatului, pot ajuta la diferențierea A. ursingii de A. junii și A. johnsonii (tabelul (tabelul1).1).
TABEL 1.
Teste fenotipice pentru diferențierea între A. ursingii, A. junii și A. johnsoniia
Test | Rezultatb pentru: | |||
---|---|---|---|---|
A. ursingii | A. junii | A. johnsonii | ||
Creștere la 37°C în bulion BHI | + | + | + | – |
Creștere la 41°C în bulion BHI | – | – | + | – |
Oxidarea glutaratului | + | – | – | – |
Oxidarea l-aspartat | + | – | V |
Speciile de Acinetobacter sunt frecvent izolate din mediul înconjurător și pot fi izolate, de asemenea, de la om (piele și membrane mucoase) (10). În ultimele 2 decenii, acestea au apărut ca agenți patogeni nosocomiali. La pacienții debilitați, acestea pot fi responsabile de infecții severe și fatale care implică tractul respirator, tractul urinar și rănile (inclusiv locurile de inserție a cateterelor). Factorii de risc pentru infecție includ boli grave de bază, cum ar fi cancerul, cateterizarea intravasculară sau intravezicală, tratamentul cu antibiotice cu spectru larg sau corticosteroizi, spitalizarea prelungită și șederea în unități de terapie intensivă. Datorită supraviețuirii lor prelungite în mediul înconjurător, speciile de Acinetobacter se pot răspândi în rândul pacienților și pot provoca focare asociate cu spitalele (4, 11). În cazul de față, adenocarcinomul pulmonar și administrarea de corticosteroizi au fost doi factori de risc majori pentru diseminarea lui A. ursingii în sânge. Deși A. ursingii a fost izolat numai de la om, habitatul său natural nu este cunoscut. Presupunem că acest izolat a colonizat pielea pacientului și că cateterizarea intravasculară a declanșat răspândirea sa în fluxul sanguin. Identificarea exactă a speciilor de Acinetobacter este importantă din motive epidemiologice și terapeutice. Îmbunătățirea taxonomiei și a metodelor de identificare trebuie să fie luată în considerare atunci când se analizează studiile anterioare, care au folosit adesea denumiri sau metode care nu mai sunt valabile. Speciile de Acinetobacter implicate în infecțiile umane și sensibilitățile antimicrobiene ale acestora rămân parțial nedeterminate. A. ursingii nu a fost raportată în procesele infecțioase, cu excepția descrierii sale recente ca specie nouă (8). Cu toate acestea, această specie poate avea aceeași importanță medicală ca și izolatul nostru. Într-adevăr, din cele 29 de tulpini raportate în literatura de specialitate, 13 au fost izolate din sângele unor pacienți care sufereau de boli subiacente grave. Mai mult, tulpinile de A. ursingii pot avea potențialul de a se răspândi la alți pacienți, după cum a demonstrat tipizarea moleculară (7). Din aceste motive, microbiologii clinicieni trebuie să fie conștienți de patogenitatea oportunistă a acestei specii recent descrise, care merită studii suplimentare pentru a determina prevalența sa la om.
.