Team:Cambridge/Protocoale/Precipitarea cu acetonă a proteinelor

Înapoi la protocoale

• 1 Precipitarea cu acetonă a proteinelor
  • 1.1 Teorie
  • 1.2 Practică
  • 1.3 Siguranță

Precipitarea cu acetonă a proteinelor

După purificarea proteinelor este necesar să se elimine substanțele chimice reținute din tampoanele de eluție și să se concentreze proba de proteine pentru a permite prelucrarea în aval.

Teorie

Proteinele sunt insolubile în acetonă (în special la temperaturi scăzute), în timp ce multe molecule mici care ar putea interfera cu prelucrarea în aval a proteinelor sunt solubile. Prin precipitarea proteinelor în acest solvent puteți îndepărta contaminantul tampon și concentra proteinele într-un granuleț care poate fi redisolvat de alți solvenți.

Practică

1. Cu aproximativ 30 de minute înainte de a începe, răciți o probă de acetonă de 4 ori mai mare decât volumul soluției de proteine pe care doriți să o precipitați într-un congelator la -20.
2. Vărsați proba de proteine în tuburi de centrifugare pentru centrifuga de masă.
3. Adăugați acetonă rece la proba de proteine.
4. Amestecați tuburile cu ajutorul unui vortex pentru a le amesteca.
5. Incubați timp de 60 de minute la -20.
6. Centrifugați timp de 10 minute la 13 000 xG
7. Decantați supernatantul – încercați să nu deranjați granulele.
8. Lăsați capacele de pe tuburi pentru a lăsa acetona rămasă să se evapore.
9. Redisolvați în orice tampon de care au nevoie procesele din aval.

Siguranță

.