Endokannabinoidijärjestelmän (EC) avainmolekyylien 2-arachidonoyyliglyserolin (2AG) ja arachidonoyylietanoliamidin (anandamidi, AEA) analysointi on haastavaa useiden erityispiirteiden vuoksi. 2AG isomeroituu spontaanisti biologisesti inaktiiviseksi analogikseen 1-arachidonoyyliglyseroliksi (1AG) asyylimigraation avulla, ja se on vain kromatografisesti erotettavissa 1AG:sta. Matriisi-ilmiöt, jotka johtuvat pääasiassa yhdessä uutetuista fosfolipideistä, voivat heikentää analyysia entisestään. Lisäksi 2AG ja 1AG ovat epästabiileja tietyissä olosuhteissa, kuten liuottimen haihduttamisessa tai kuivattujen uutteiden palauttamisessa. Tutkimme erilaisten orgaanisten liuottimien ja niiden seosten, kuten tolueenin, etyyliasetaatin ja kloroformi-metanolin, vaikutuksia 2AG/1AG-isomerisaatioon, 2AG/1AG:n stabiilisuuteen ja matriisivaikutuksiin 2AG:n ja AEA:n UPLC-MS/MS-analyysissä ihmisen plasmassa. Tolueeni esti sekä 2AG:n isomeroitumisen 1AG:ksi että 2AG/1AG:n hajoamisen haihtumisen aikana. Tolueeniuutteet sisälsivät vain 2 prosenttia matriisivaikutusta aiheuttavia plasman fosfolipidejä verrattuna perinteisesti käytetystä kloroformi-metanoli-liuottimen seoksesta saatuihin uutteisiin. Tolueenilla ja kaikilla muilla testatuilla orgaanisilla liuottimilla saadaan vertailukelpoinen 2AG:n ja AEA:n uuttotulos (60-80 %). Näiden tolueenin suotuisten ominaisuuksien perusteella kehitimme ja validoimme UPLC-MS/MS-menetelmän positiivisella sähkösuihkuionisaatiolla (ESI+), joka mahdollistaa 2AG:n ja AEA:n samanaikaisen tarkan ja täsmällisen mittaamisen ihmisen plasmasta. UPLC-MS/MS-menetelmä ristiinvalidoitiin aiemmin kuvatun täysin validoidun GC-MS/MS-menetelmän kanssa AEA:lle ihmisen plasmassa. UPLC-MS/MS-menetelmällä (y) ja GC-MS/MS-menetelmällä (x) saatujen tulosten välillä havaittiin läheinen korrelaatio (r(2)=0,821) (y=0,01+0,85x). UPLC-MS/MS-menetelmä soveltuu 2AG:n ja AEA:n rutiinimittaukseen ihmisen plasmanäytteistä (1 ml) kliinisissä olosuhteissa, kuten 100 päivän aikana käsitellyt laadunvalvonnan plasmanäytteet osoittivat. UPLC-MS/MS-menetelmää laajennettiin edelleen ihmisen virtsaan. Virtsassa AEA:ta ei voitu havaita, ja 2AG:ta havaittiin vain kolmessa terveiden henkilöiden 19 näytteestä, 160, 180 ja 212 pM:ssä, mikä vastaa 12,3, 14,5 ja 9,9 pmol/mmol kreatiniinia.