Den potentiella användningen av inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs) i personliga tillämpningar av regenerativ medicin kan ökas med hjälp av transgenics, inklusive uttryck av konstitutiva cellmärken, differentieringsrapportörer eller modulatorer av sjukdomsfenotyper. Det finns därför ett behov av reproducerbart transgenuttryck bland iPSC-subkloner med isogena eller olika genetiska bakgrunder. Vid användning av virus- eller transposonvektorer är det svårt att kontrollera transgenintegrationsställen och antalet kopior, och det är nästan omöjligt att reproducera dem i flera cellinjer. Dessutom är slumpmässigt integrerade transgener ofta föremål för pleiotropa positionseffekter som en följd av epigenetiska förändringar som är inneboende i differentieringen, vilket undergräver tillämpningar i iPSC. För att lösa detta har vi anpassat populära TALEN- och CRISPR/Cas9-nukleastekniker för att införa transgener i fördefinierade loci och övervinna slumpmässiga positionseffekter. AAVS1 är ett exemplariskt lokus inom PPP1R12C-genen som möjliggör ett robust uttryck av CAG-promotordrivna transgener. Genmålsättning kontrollerar kopian av transgenen på ett sådant sätt att uttrycksmönstren för rapporteringsenheterna är reproducerbara och skalbara med ∼2-faldigt. Dessutom bibehålls genuttrycket under långvarig odling av humana iPSC och in vitro-differentiering längs flera linjer. Här beskriver vi vårt AAVS1-målprotokoll med hjälp av standardiserade donatorvektorer och konstruktionsmetoder, samt ger praktiska överväganden för iPSC-kultur, läkemedelsurval och genotypning.