Under läkningsprocessen efter ett benbrott bildas mjukt kallus i anslutning till frakturstället, som ersätts av hårt kallus och slutligen återbildas till den ursprungliga benkonfigurationen. Även om periostets cambiumskikt rapporteras spela en viktig roll i callusbildningen saknar vi fortfarande direkta in vivo-bevis för detta. För att undersöka cellinjen i det mjuka kalluset analyserade vi frakturläkningsprocessen i Prx1-Cre;ROSA26-reporter (R26R), Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R, Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R, Sox9-CreERT2;R26R och Sox9-LacZ-möss med X-gal-färgning. Hos Prx1-Cre;R26R, där cellerna i periosteum färgade för X-gal före fraktur, var alla celler i den mjuka kallusen X-gal-positiva, medan cellerna i periosteum före fraktur hos Col1a1(3,6 kb)-Cre;R26R-mössen färgade för X-gal och den mjuka kallusen delvis bestod av X-gal-positiva celler. I Col1a1(2,3 kb)-Cre;R26R-möss, där de mogna osteoblasterna i periostets kambiumskikt markerades före frakturen, var däremot inga celler i det mjuka kalluset vid frakturstället X-gal-positiva. Dessa resultat tyder på att de flesta cellerna i den mjuka kallusen härstammar från mesenkymala progenitorer i periosteum och inte från mogna osteoblastiska celler. Intressant nog uppstod Sox9-LacZ-mössens Sox9-uttryckande X-gal-positiva celler i periost i anslutning till frakturstället tre dagar efter frakturen. Vi visade detta genom att injicera tamoxifen i Sox9-CreERT2;R26R-mössen 3 dagar efter frakturen, så att dessa Sox9-uttryckande periostala celler gav upphov till celler i de mjuka och hårda kalierna. Våra resultat visar att de periostala celler i vilka Sox9-uttryck induceras strax efter fraktur är den huvudsakliga källan till kondrocyter och osteoblaster i frakturkallus.