Kära redaktör,
Det har nyligen hävdats att Ellmans metod inte har tillräcklig noggrannhet för mätning av kolinesterasaktiviteter (Komersová et al., 2007; Sinko et al., 2007; Pohanka et al., 2011; Dingova et al., 2014). Denna metod introducerades och beskrevs först av Ellman och hans kollegor och bygger på tiokolin-derivat (acetyl- eller butyryl) hydrolys av ChEs (äkta eller pseudo) och reaktion av resulterande tiokolin med tiolreagens 5,5′-dithiobis-2-nitrobenzoesyra (DTNB) och bildning av 5-thio-2-nitrobenzoesyra (TNB)-anjon. Genom att mäta absorptionen av TNB-jonen vid 410 nm för pseudo-ChE och 440 nm för reticulocytärt acetyl-ChE bestäms indirekt ChE-aktiviteten (Ellman et al., 1961). Vissa författare föreslog att indoxylacetat är ett bättre substrat än acetyltiokolin (ATCH) eftersom det inte reagerar med oximantidotiner och tiol som används för Ellmans metod (Pohanka et al., 2011). Dessutom interagerar DTNB, som är instabil, med fria sulfhydrylgrupper i provet och kan påverka kolinesterasaktiviteten (Dingova et al., 2014). Andra forskare visade att oximer reagerar med ATCH (oximolys) och producerar tiokolin och följaktligen TNB-jonen (Sinko et al., 2007). Vissa författare nämnde också att när koncentrationen av DTNB är mycket högre än koncentrationen av ATCH minskar hydrolyshastigheten för ATCH, vilket resulterar i en lägre uppmätt ChE-aktivitet (Komersová et al., 2007).
Och även om ovan nämnda problem har angetts om Ellmans metod har vart och ett av dem sin egen logiska lösning. För det första, genom enkel lämplig utspädning av provet, späds även de tiol- och oximinnehållande föreningarna i provet ut och därmed minskas omfattningen av DTNB:s reaktion med dessa ämnen avsevärt (Mohammadi et al., 2017). För det andra är de molära dämpningskoefficienterna för indoxylacetat och TNB 3900 M-1.cm-1 (Pohanka et al., 2011) respektive 13600 M-1.cm-1 (Ellman et al., 1961). Således är detektionsgränsen för mätning av ChE-aktivitet med DTNB cirka 3,5 gånger lägre än med indoxylacetat. För det tredje, för DTNB-koncentrationer på 0,2-0,598 mM är det bästa förhållandet mellan DTNB/ATCH-koncentrationer 1,25-3,74, vilket resulterar i optimal hastighet för ATCH-hydrolys av ChE (Komersová et al., 2007).