Team:Cambridge/Protokoll/Acetonfällning av proteiner

Tillbaka till protokollen

• 1 Acetonfällning av proteiner
  • 1.1 Teori
  • 1.2 Praxis
  • 1.3 Säkerhet

Acetonfällning av proteiner

Efter rening av proteiner är det nödvändigt att avlägsna kemikalier som finns kvar i elutionsbuffertarna och att koncentrera proteinprovet för att möjliggöra nedströmsbehandling.

Teori

Proteiner är olösliga i aceton (särskilt vid låga temperaturer) medan många små molekyler som kan störa nedströmsarbetet med proteiner är lösliga. Genom att fälla proteiner i detta lösningsmedel kan man avlägsna buffertföroreningar och koncentrera proteinet till en pellet som kan lösas upp på nytt med andra lösningsmedel.

Praktik

1. Ca 30 min innan du börjar kyla ner ett prov av aceton som är 4 gånger så stort som volymen av den proteinlösning som du vill fälla i en frys på -20.
2. Spill upp proteinprovet i centrifugeringsrör för bänkcentrifugen.
3. Tillsätt kall aceton till proteinprovet.
4. Vortex-rör för att blanda.
5. Inkubera i 60 minuter vid -20.
6. Centrifugera i 10 minuter vid 13 000 xG
7. Dekantera supernatanten – försök att inte störa pellen.
8. Lämna locken på rören för att låta resterande aceton avdunsta.
9. Lös om i den buffert som processerna i efterföljande led kräver.

Säkerhet