Takaisin pöytäkirjoihin
- 1 Proteiinien asetonisaostus
- 1.1 Teoriaa
- 1.2 Käytäntö
- 1.3 Turvallisuus
Proteiinien asetonisaostus
Proteiinipuhdistuksen jälkeen on tarpeen poistaa eluutiopuskureihin jääneet kemikaalit ja konsentroida proteiininäyte jatkokäsittelyä varten.
Teoria
Proteiinit ovat liukenemattomia asetoniin (erityisesti alhaisissa lämpötiloissa), kun taas monet pienet molekyylit, jotka voivat häiritä proteiinien jatkokäsittelyä, ovat liukoisia. Saostamalla proteiinit tässä liuottimessa voit poistaa puskurikontaminanttia ja konsentroida proteiinin pelletiksi, joka voidaan liuottaa uudelleen muilla liuottimilla.
Käytäntö
- Jäähdytä noin 30 min ennen aloittamista näyte asetonia 4 kertaa sen proteiiniliuoksen tilavuuden verran kuin mitä aiot saostaa -20 pakastimessa.
- Kaada proteiininäyte sentrifugiputkiin työpöydän sentrifugiin.
- Lisää kylmää asetonia proteiininäytteeseen.
- Vortex-putket sekoitetaan.
- Inkuboi 60 minuuttia -20:ssa.
- Sentrifugoi 10 minuuttia 13 000 xG:ssä
- Tyhjennä supernatantti – yritä olla häiritsemättä pellettiä.
- Jätä kannet pois putkista, jotta jäljelle jäänyt asetoni haihtuu.
- Liuota uudelleen puskuriin, jota myöhemmät prosessit vaativat.